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    鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)

    點(diǎn)擊次數(shù):748次  更新時(shí)間:2019-11-09
    鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒的實(shí)驗(yàn)步驟:
    典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
    將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下使其變性解成單鏈;
      人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
      耐熱的DNA聚合酶在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
     
    鮑皰疹樣病毒PCR試劑盒的注意事項(xiàng):
    1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
    2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
    3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
    4.PCR試劑配制應(yīng)使用高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
    5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
    6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
    7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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